掃描電鏡樣本干燥方法介紹及優缺點對比

　　掃描電鏡觀察樣品要求在高真空中進行。無論是水或脫水溶液，在高真空中都會產生劇烈地汽化，不僅影響真空度、污染樣品，還會破壞樣品的微細結構。因此，樣品在用電鏡觀察之前必須進行干燥。

　　來介紹三種干燥方法主要有：空氣干燥法、臨界點干燥法、冷凍干燥。

　　干燥方法優缺點

　　空氣干燥優點： 簡便易行、節省時間

　　缺點：由于脫水劑揮發時表面張力的作用，組織塊會產生收縮變形

　　臨界點干燥優點： 較好地保存樣品的微細結構；操作較方便， 快速2～3小時即可完成，常用

　　缺點：需要特殊儀器設備---臨界點干燥儀。

　　含水樣品直接冷凍干燥優點：無需脫水，不會使樣品收縮，較早使用的方法

　　缺點：花費時間長，消耗液氮多，易產生冰晶損傷，未被廣泛應用。

　　樣品脫水后冷凍干燥優點： 可減少冰晶損傷，且干燥時間短

　　缺點：有機溶劑對樣品成分有抽提作用，造成部分內含物丟失。

　　一、空氣干燥法

　　基本描述：將經過脫水的樣品，讓其暴露在空氣中使脫水劑逐漸揮發干燥 ，也可直接(不脫水)放在干燥器中干燥。

　　常用方法

　　方法1：單固定或雙固定→脫水→樣品置于100％的脫水劑中→在空氣中自然干燥；

　　方法2：固定→（組織導電處理）→浸泡在緩沖液與乙醚的1：1中5min→空氣干燥；

　　方法3：單固定或雙固定→乙醇脫水→浸沒于六甲基二硅胺烷HMDS中二次每次15min→通風廚干燥1h

　　二、臨界點干燥法(CPD: critical point dryer)

　　1.基本含義：臨界點干燥法是利用物質在臨界狀態時，其表面張力等于零的特性，使樣品的液體完全汽化，并以氣體方式排掉，來達到完全干燥的目的。

　　2.基本概念：臨界點：物質的氣態和液態兩相之間達到相同密度、成為均一流體時的溫度和壓力的總稱。此時的溫度稱為臨界點溫度，壓力稱為臨 界點壓力。

　　3.中間劑：把用來置換脫水劑而后又被干燥劑所置換的液體。

　　4.常用干燥劑

　　co2，F-13，F-23，F-116，N2O

　　5.常用中間劑：

　　中間劑：把用來置換脫水劑而后又被干燥劑所置換的液體。

　　試劑：乙醇、甲醇、丙酮

　　6.干燥過程：固定脫水→轉入中間液→移至樣品室→用液體CO2置換乙醇 →CO2汽化排氣→干燥

　　7.臨界點干燥失敗（不徹底）的原因：

　　(1) 脫水不徹底

　　(2) 中間溶劑清洗不干凈

　　(3) 樣品室溫度高，注入CO2困難注入CO2量太少

　　(4) 樣品室漏氣

　　三、冷凍干燥

　　1.基本描述：將經過冷凍的樣品置于高真空中，通過升華除去樣品中的水分或脫水劑的過程。

　　2.含水樣品直接冷凍干燥常規步驟： 取材→固定→冷凍保護處理→快速冷凍→升華（10-2Pa）干燥→裝臺鍍膜

　　3.樣品脫水后的冷凍干燥基本描述：樣品用乙醇或丙酮脫水后過渡到某些易揮發的有機溶劑中，然后連同這些溶劑一起冷凍并在真空中升華而達到干燥

　　補充材料：

　　（1）對于微生物等微小的生物樣品，如果想要操作簡便，可以選用自然干燥法或烘干干燥法；如果想要獲得較好的效果，建議選用臨界點干燥法或真空干燥法。

　　（2）一般來說，含水量較少、細胞壁和蠟質層較厚的植物組織多采用自然干燥法，而幼嫩、含水分較多的組織則需要選擇其他方法。臨界點干燥法和叔丁醇真空干燥法幾乎適用于各類型的植物樣品。

　　（3）臨界點干燥法是動物樣品的首選干燥方法。考慮到操作的簡便性，對于含水量低且觀察部位相對較硬的動物樣品也可以采用自然干燥法，但是含水量高且較柔軟的樣品推薦采用臨界點干燥或叔丁醇真空干燥法。